Efeito da vitamina d na modulação da expressão de toll-like receptors (tlr-7 e tlr-9), expressão de il-6 e inf-y; em linfócitos b e t na uremia

Efeito da vitamina d na modulação da expressão de toll-like receptors (tlr-7 e tlr-9), expressão de il-6 e inf-y; em linfócitos b e t na uremia

Author Carvalho Junior, Jose Tarcisio Giffoni de Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Dalboni, Maria Aparecida Dalboni Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Medicina (Nefrologia)
Abstract Introdução: Pacientes com doença renal crônica (DRC) apresentam deficiência de 1,25 dihidroxivitamina D (1,25(OH)2D3), forma ativa da vitamina D, em decorrência da perda da função renal. Nos últimos anos vários estudos têm relatado associação entre hipovitaminose D com maior prevalência de infecções, inflamação, DCV e mortalidade nesta população. Diante da recente descoberta que células do sistema imune expressam receptores de vitamina D e apresentam mecanismos intracelulares capazes de converter a 25 (OH)D3 na sua forma ativa, 1,25 (OH)2D3; passou-se a explorar o efeito desta vitamina como um imunomodulador. Objetivos (I) Avaliar o efeito da vitamina D sobre a expressão de TLR-7, TLR-9, CD95, IL-6 e IFN-? em linfócitos B e T de pacientes com hipovitaminose D e suplementados com colecalciferol ( estudo ?in vivo?) e (II) Avaliar o efeito da vitamina D em linfócitos B e T de indivíduos sadios insultados por soro urêmico, para a expressão de TLR-7, TLR-9, CD95, IL-6 e IFN-? (estudo ?in vitro?) MATERIAL E Métodos: Estudo In vivo: Este foi um estudo de seguimento, randomizado e controlado por placebo. Foram incluídos 32 pacientes em diálise (n=16 tratados com colecalciferol, n=16 placebo). A dosagem sérica de 25 (OH)D3, e paratormônio intacto (PTH) foi realizada por Quimiluminescência. Para as dosagens de cálcio total, cálcio ionizado e Fósforo sérico o método colorimétrico foi utilizado. Os receptores de membrana celular: CD19, CD3 e CD95 e a marcação intracelular de IL6, IFN-y, TLR9 e TLR7 em linfócitos B e T foram avaliados por Citometria de Fluxo. Estudo In vitro: Foram coletadas amostras de sangue de indivíduos sadios. As células mononucleares de sangue periférico (PBMC) foram isolados pelo por gradiente de densidade utilizado Ficoll Histopaque®. A seguir as células foram incubadas com 25 (OH)D3 ou 1,25 (OH)2D3 com soro normal ou urêmico durante 24horas em incubadora contendo 5% de CO2 a 37ºC. A detecção de CD19, CD3, CD95, IL6, IFN-y, TLR-9 e TLR7 em linfócitos B e T foram avaliados também por Citometria de Fluxo. Resultados Estudo ?in vivo?: Como esperado, houve aumento na concentração de 25(OH)D3 e redução sérica de PTH nos pacientes que receberam colecalciferol. Observamos redução na expressão de IFN-?, TLR-7, TLR-9 e CYP24 em linfócitos B e T e aumento na expressão de VDR e CYP27b1 no grupo que recebeu colecalciferol. Não observamos diferenças na expressão de IL-6 e CD95. Estudo ?in vitro?: Observamos maior expressão de TLR-7, TLR-9, CD95, IL-6 e IFN-? e CYP24a1 em linf B e T quando insultados com soro urêmico. Quando estas células foram incubadas com as duas formas da vitamina D, observamos que o tratamento com 25(OH)D3 reduziu a expressão de TLR7 e TLR9 em linfócitos B insultados com soro urêmico e a 1,25 (OH)2D3 reduziu a expressão de IL6 e TLR9 em linfócitos T insultados com soro urêmico. Realizamos o silenciamento do gene da CYP24a1 hidroxilase e observamos efeito adicional do efeito de ambas as formas da vitamina D na redução de IL6, IFN-?, TLR7 e TLR9 nos linfócitos T e B . Conclusão: Nossos resultados mostram que o ambiente urêmico induz a expressão de mediadores inflamatórios e que o tratamento com Vitamina D é capaz de inibir a expressão destes nos linfócitos B e T in vivo e in vitro . Isto sugere que o uso da vitamina D tem efeito benéfico na modulação da inflamação. Adicionalmente, nossos resultados in vitro sugerem que o efeito anti-inflamatório da vitamina D possa ser potencializado com a inibição da CYP24a1 no ambiente urêmico.
Keywords vitamina d
receptor toll-like
citocinas
linfócitos
uremia
Language Portuguese
Date 2015-12-31
Published in CARVALHO JUNIOR, Jose Tarcisio Giffoni de. Efeito da vitamina d na modulação da expressão de toll-like receptors (tlr-7 e tlr-9), expressão de il-6 e inf-y; em linfócitos b e t na uremia. 2015. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2015.
Research area Medicina
Knowledge area Ciências da saúde
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=2767443
Access rights Closed access
Type Thesis
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/49039

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