Indução da transição epitelial mesenquimal (tem), através de íons oxalato (ox) e oxalato de cálcio (caox) in vitro, em células renais e in vivoEfeito da bmp-7

Abstract

A TEM é um processo biológico que possibilita a uma célula epitelial polarizada adquirir um fenótipo de células mesenquimais, que irá lhe atribuir o aumento da capacidade migração e invasão, elevada resistência a apoptose e aumento da produção de componentes de matriz extracelular, podendo participar do processo fibrose. Ela pode ocorrer em resposta a uma série de condições de estressantes, incluindo o estresse mecânico, hipóxia e estresse oxidativo. Paralelamente, a hiperoxalúria está associada à litíase renal, fibrose intersticial e insuficiência renal progressiva. Interessantemente, a proteína óssea morfogenética-7 (BMP-7) tem emergido como uma citocina antifibrótica. Estudos demonstram que a administração da BMP exógena humana recombinante-7 (rhBMP-7) proporciona a recuperação do rim em modelos animais de lesão renal aguda e crônica.Assim sendo, o objetivo deste estudo foi avaliar o fenômeno da TEM ?in vitro?, em células HK-2 estimuladas com Ox, CaOx e TGF-? e ?in vivo? em camundongos submetidos aos modelos de hiperoxalúria, através da hidroxy-l- prolina (HPL), bem como analisar a possível reversão da TEM após tratamento com a BMP-7.Na análise ?in vitro?, os estímulos com Ox (0,5 mM), CaOx (50 ug / ml) e TGF-? (10 ng/ml) foram eficazes em induzir a TEM, em células HK-2 após período de 48 horas. Os estímulos diminuíram a expressão gênica e a síntese proteica do marcador epitelial e-caderina e citoqueratina e aumentaram a expressão gênica e a síntese proteica do marcador mesenquimal ?-actina de músculo liso. Também observamos aquisição da capacidade migratória e invasiva nas células HK-2, bem como sua mudança fenotípica. O principal mediador da TEM, que é o TGF-?, apresentou-se significativamente aumentado, enquanto a proteína óssea morfogenética- 7 (BMP-7) figurou-se significativamente menor. A eficiência da BMP-7 em reverter a TEM em células HK2 foi testada através do tratamento com a rhBMP-7 exógena (50ng/ml) e por meio da superexpressão endogena da BMP-7, por transfecção, concomitantemente aos estimuladores da TEM (Ox, CaOx e TGF-?)Em ambas as estratégias adotadas, a BMP-7 foi eficaz em reverter a TEM. Observamos uma preservação da característica morfológica de células epiteliais e uma diminuição da capacidade migratória e invasiva, semelhante à situação controle. A análise da imunoexpressão nos mostrou que o tratamento foi efetivo em bloquear a diminuição dos marcadores epiteliais e o aumento da expressão do marcador mesenquimal. Observamos resultados similares após mensuração de sua expressão gênica. Nestas condições houve diminuição na expressão gênica e proteica do TGF-?.Na análise in vivo, nos animais hiperoxaluricos (60 dias), conseguimos observar um aumento da creatinina e uréia séricas, uma diminuição no clearance de creatinina, com aumento de oxalato urinário e maior quantidade de cristais de oxalato de cálcio na urina. Observamos lesão glomerular e infiltração de células inflamatórias. A análise do córtex renal mostrou a diminuição dos marcadores epiteliais e- caderina e citoqueratina com o aumento dos marcadores mesenquimais ?-actina de músculo liso e vimentina. Estes efeitos foram inibidos através do tratamento com a BMP-7.Diante dos resultados apresentados, sugerimos que o oxalato e oxalato de cálcio induziram a TEM, possivelmente pelo aumento da expressão do TGF-?. Este efeito foi bloqueado pela BMP-7 possivelmente por diminuir a produção deste fator de crescimento. Estes mecanismos podem ter implicações no desenvolvimento da fibrose renal.