Estudo do condicionamento nefrotóxico no mecanismo reparador parácrino de células estromais mesenquimais

Estudo do condicionamento nefrotóxico no mecanismo reparador parácrino de células estromais mesenquimais

Author Garcia, Jessica Suller Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Borges, Fernanda Teixeira Borges Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Medicina (Nefrologia)
Abstract New strategies for treatment and prevention are needed for Acute Kidney Injury (AKI), including mesenchymal stromal cells (MSC). Studies have shown that MSC mitigate the damage and/or accelerate the repairing paracrine process, by releasing protein growth factors and RNAs to the external environment, the latter are also present in the extracellular vesicles (EV). Therefore, the effect of conditioned medium (CM) of the MSC and its variants were evaluated in human renal proximal tubular cells (HK2), which were exposed to two types of insults involved in AKI. HK2 cells were subjected to Gentamicin (2 mM) and LPS (100 ?g/ml) from 24 up to 96 h. Necrosis and apoptosis were evaluated by acridine orange/ethidium bromide and HOECHST 33342, respectively, and cell proliferation by MTT. The damage to DNA was determined by immunofluorescence for histone ?-H2Ax and EV were quantified with NanoSight. The results demonstrate that CM decreased cell death and stimulated the proliferation of HK2 exposed to LPS, but not to Gentamicin, which provided greater damage to DNA. With variants of the CM found that RNAs and proteins are important for the protection of exposed HK2 to nephrotoxic agents (NA). There was no difference in the size of EV between the MC and its variants, but the MCs stimulated with NA have a lower amount of EV. The CM or a fraction of that may be an alternative to the use of MSC in preventing/treating AKI.

Novas estratégias de tratamento e prevenção são necessárias para a Lesão Renal Aguda (LRA), entre elas estão as células estromais mesenquimais (MSC). Estudos mostram que as MSC atenuam os danos e/ou aceleram o reparo por processos parácrinos, ao liberarem fatores de crescimento proteícos e RNAs para o meio externo, esses últimos também estão presentes nas vesículas extracelulares (VE). Assim, o efeito do meio condicionado (MC) das MSC e de seus variantes foram avaliados em células tubulares proximais renais humanas (HK2), as quais foram expostas a dois tipos de insultos envolvidos na LRA. Células HK2 foram submetidas à Gentamicina (2 mM) e LPS (100 ?g/ml) de 24 a 96 h. Foram avaliadas necrose e apoptose por acridina orange/brometo de etídeo e HOECHST 33342, respectivamente, e proliferação celular por MTT. A lesão ao DNA foi determinada por imunofluorescência para histona ?-H2Ax e as VE foram quantificadas através do NanoSight. Os resultados demonstraram que o MC diminuiu a morte celular e estimulou a proliferação das células HK2 expostas ao LPS, mas não à Gentamicina, que propiciou maior lesão ao DNA. Com os variantes do MC verificamos que RNAs e proteínas são importantes para a proteção das HK2 expostas aos agentes nefrotóxicos (AN). Não verificamos diferença no tamanho das VE entre o MC e seus variantes, mas os MCs estimulados com os AN apresentam menor quantidade de VE. O MC ou uma fração desse pode ser uma alternativa ao uso das MSC na prevenção/tratamento da LRA.
Keywords mesenchymal stromal cells
conditioned medium and paracrine effect
células estromais mesenquimais
meio condicionado e efeito parácrino
Language Portuguese
Date 2016-08-31
Published in GARCIA, Jessica Suller. Estudo do condicionamento nefrotóxico no mecanismo reparador parácrino de células estromais mesenquimais. 2016. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2016.
Research area Medicina
Knowledge area Ciências da saúde
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4700626
Access rights Closed access
Type Thesis
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47279

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