Processamento e solubilização das isoformas com 65 e 90 kda da enzima conversora de angiotensina i (eca) nas células mesangiais

Processamento e solubilização das isoformas com 65 e 90 kda da enzima conversora de angiotensina i (eca) nas células mesangiais

Author Aragao, Danielle Sanches Autor UNIFESP Google Scholar
Advisor Casarini, Dulce Elena Casarini Autor UNIFESP Google Scholar
Institution Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Graduate program Medicina (Nefrologia)
Abstract A ECA é uma zinco dipeptidil carboxipeptidase envolvida na regulação da pressão arterial e na homeostase eletrolítica e de fluidos. Apresenta-se sob as formas somática e germinal, ambas transcritas a partir de um único gene e descritas como proteínas transmembranicas tipo I e que são proteoliticamente processadas próximas à membrana plasmática, na porção extracelular, sendo seus domínios ativos C e N liberados da superfície celular pela ação de secretases ou sheddases ainda não descritas na literatura. Suas isoformas solúveis N-domínio foram descritas apresentando 108 kDa (68 kDa na forma deglicosilada) no fluido ileal, outra com 90 kDa, presente em tecidos, células mesangiais (CMs) e urina de ratos SHR e com 65 kDa, presente em tecidos, CMs primárias ou imortalizadas, proximais, células IMCD e urina de ratos normotensos (Wistar). Uma vez que as CMs apresentam as formas somática e solúveis N-domínio da ECA e constituem-se um modelo experimental adequado ao estudo do processo de shedding dessa enzima, o objetivo deste estudo foi investigar a existência de uma ou mais secretases que possam atuar na hidrólise da ECA de alta massa molecular (somática), originando então as isoformas N-domínio com 90 e 65 kDa nestas células. Neste estudo, foram utilizadas culturas de CMs imortalizadas de camundongo e primárias de ratos SHR, cujos lisados celulares foram purificados separadamente com a utilização dos substratos fluorogênicos construídos a partir da clivagem C-terminal da ECA somática para as possíveis enzimas responsáveis pela geração das isoformas solúveis N-domínio: S1 para secretase geradora da ECA com 65 kDa (Abz- RWGVFSGRTPQ-EDDnp) e S2 para a secretase geradora da ECA com 90 kDa (Abz- EYQWHPPLPDNYQ-EDDnp). Foram obtidos dois pools cromatográficos no processo de purificação para o lisado de ambas as culturas, sendo que o número 2 apresentou maior atividade sobre os substratos, tendo o conteúdo proteico posteriormente analisado e sequenciado, levando à identificação de serino proteases. A Matriptase-3, com massa molecular de 80 kDa, foi a enzima identificada com homologia às serino proteases SH1 (48kDa) e STH2 (60 kDa, semelhante à Matriptase-3), purificadas de urina humana e que foram capazes de clivar a ECA somática e gerar isoformas com 65 e 90 kDa. O pool 2, oriundo da purificação da CMI, foi capaz de clivar a ECA somática gerando uma isoforma com 65 kDa. Estes resultados sugerem que as isoformas Ndomínio da ECA, com massas moleculares de 65 e 90 kDa, são geradas a partir de diferentes serino proteases presentes nas CMs de animais normotensos e hipertensos e que, provavelmente, possuem modulações distintas nesses modelos experimentais, uma vez que a isoforma com 90 kDa está presente somente em animais e indivíduos com hipertensão ou predispostos geneticamente ao desenvolvimento dessa patologia.
Keywords enzima conversora de angiotensina
enzima conversora de angiotensina
isoformas solúveis
shedding
células mesangiais
Language Portuguese
Date 2013-10-30
Published in ARAGAO, Danielle Sanches. Processamento e solubilização das isoformas com 65 e 90 kda da enzima conversora de angiotensina i (eca) nas células mesangiais. 2013. 210 f. Tese (Doutorado) - Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP), São Paulo, 2013.
Research area Medicina
Knowledge area Ciências da saúde
Publisher Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)
Extent 210 p.
Origin https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=130642
Access rights Closed access
Type Thesis
URI http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46749

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